細(xì)胞復(fù)蘇新方案，IKA MATRIX 恒溫混勻儀

細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的日常，都是跟細(xì)胞培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇這些基本的操作密不可分的。在細(xì)胞凍存和復(fù)蘇領(lǐng)域一直奉行著一條黃金法則，那就是“慢凍快融”！ 實(shí)驗(yàn)證明這樣可以最大限度的保存細(xì)胞活力。

 慢凍

細(xì)胞是很脆弱的，尤其是哺乳動(dòng)物細(xì)胞，只有一層薄薄的細(xì)胞膜，沒有堅(jiān)固的細(xì)胞壁保護(hù)，在進(jìn)入凍存狀態(tài)前，緩慢的降溫過程有助于保存細(xì)胞的活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜（DMSO）作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。標(biāo)準(zhǔn)的凍存程序?yàn)榻禍厮俾?1～-2℃/ min；當(dāng)溫度達(dá)-25℃以下時(shí)，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時(shí)，則可迅速浸入液氮中。

快融

 細(xì)胞復(fù)蘇，是指將凍存在液氮或者-70℃冰箱中的細(xì)胞解凍之后重新培養(yǎng)，細(xì)胞恢復(fù)生長(zhǎng)的過程。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成的損傷。

 最常見的復(fù)蘇工具

水作為一種使用廣泛的導(dǎo)熱介質(zhì)，具有良好的導(dǎo)熱性，可以保證快速加熱，同時(shí)也可防止凍存管內(nèi)部的局部過熱。水浴是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)配置之一，在進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)時(shí)，無需額外的輔助設(shè)備或試劑。然，水浴經(jīng)常是作為實(shí)驗(yàn)室共享的設(shè)備，若無專人值守，則水浴槽內(nèi)的水不會(huì)定期進(jìn)行更換，就會(huì)攜帶污染，會(huì)間接導(dǎo)致復(fù)蘇細(xì)胞的污染風(fēng)險(xiǎn)。復(fù)蘇過程，常伴隨著對(duì)凍存管的晃動(dòng)（晃動(dòng)可以防止管內(nèi)樣品產(chǎn)生溫度差異），管蓋處也有滲入水的可能。